PEI轉(zhuǎn)染試劑是通過納米技術(shù)合成,通過物理作用與核酸結(jié)合,濃縮包裹核酸,從而保護核酸免受免疫系統(tǒng)破壞,同時增強核酸進入細胞核中表達。不含任何動物來源成分,由于處于納米尺度,粒徑小,不易引起免疫反應(yīng),不影響動物和器官組織的功能,可以多次在同一動物注射。
PEI轉(zhuǎn)染試劑的分類:
第1代陽離子納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑,系聚乙二胺類轉(zhuǎn)染試劑,占到市場上90%以上,十分適合于一般實驗。但用于新藥研究,三期臨床有風(fēng)險。因為細胞毒性大。
第2代陽離子納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑,系聚alpha賴氨酸組氨酸類轉(zhuǎn)染試劑,大大降低了細胞毒性。
第3代陽離子納米聚合物轉(zhuǎn)染試劑,系聚epsilon賴氨酸組氨酸類轉(zhuǎn)染試劑,基本消除了細胞毒性。國內(nèi)已有生產(chǎn)。
PEI轉(zhuǎn)染試劑的操作流程:
1、細胞鋪板:
提前一天將細胞種植在六孔板中,以轉(zhuǎn)染時細胞密度在70%~80%為宜。
2、轉(zhuǎn)染過程:
?、?、在轉(zhuǎn)染前2h,移除細胞上原有的培養(yǎng)基,換為新鮮的*培養(yǎng)基。
?、凇?ug質(zhì)粒DNA用50uL無血清稀釋液稀釋,充分混勻制成DNA稀釋液。
?、?、向DNA稀釋液中直接加入4uL轉(zhuǎn)染試劑,室溫靜置10~15min。轉(zhuǎn)染復(fù)合物配制完成。
?、?、將轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入細胞培養(yǎng)基中,輕柔混勻。
?、?、繼續(xù)培養(yǎng)24~48h,收取細胞進行鑒定或加入相應(yīng)抗生素篩選穩(wěn)定克隆。
⑥、使用本產(chǎn)品轉(zhuǎn)染后一般在24h開始進入表達高峰期,36~48h達到表達高峰,相對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劉,達到峰值的時間延后約6~12h。